NOD樣受體1elisa試劑盒是一種用于檢測生物樣本中NOD1蛋白表達(dá)水平的免疫學(xué)檢測工具,在感染免疫、炎癥反應(yīng)和細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)研究中具有重要應(yīng)用價值。 一、??工作原理:特異性抗體識別與信號放大??
NOD樣受體1elisa試劑盒基于酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)技術(shù),通過雙抗體夾心法檢測NOD1蛋白。其核心原理是:
??1、固相抗體捕獲??:微孔板預(yù)先包被針對NOD1蛋白的特異性捕獲抗體,樣本中的NOD1蛋白與之結(jié)合形成固相復(fù)合物。
??2、檢測抗體識別??:加入生物素標(biāo)記的檢測抗體,與NOD1蛋白的另一表位結(jié)合,形成"抗體-抗原-抗體"夾心結(jié)構(gòu)。
3、??信號放大系統(tǒng)??:加入酶標(biāo)記的鏈霉親和素,與生物素結(jié)合形成復(fù)合物。加入顯色底物,酶催化底物產(chǎn)生可測量的顏色變化,顏色深淺與樣本中NOD1濃度成正比。
4、該技術(shù)利用抗原-抗體特異性結(jié)合和酶催化信號放大,具有高靈敏度和良好的特異性。
??二、實驗方法:標(biāo)準(zhǔn)化操作流程??
??1、樣本準(zhǔn)備??
收集細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清或組織勻漿等樣本,避免反復(fù)凍融。NOD樣受體1elisa試劑盒支持直接檢測裂解液,簡化前處理步驟。
??2、加樣與孵育??
將樣本或標(biāo)準(zhǔn)品加入預(yù)包被抗體的微孔板中,室溫或4℃孵育1-2小時,使NOD1蛋白與固相抗體充分結(jié)合。
??3、洗滌與檢測抗體結(jié)合??
洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后,加入生物素標(biāo)記的檢測抗體,再次孵育使抗體與NOD1蛋白結(jié)合。
??4、信號標(biāo)記與顯色??
加入酶標(biāo)記的鏈霉親和素,孵育后洗滌,加入顯色底物。避光反應(yīng)一定時間后終止反應(yīng)。
??5、吸光度測定與數(shù)據(jù)分析??
使用酶標(biāo)儀在特定波長下測定各孔吸光度值。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本中NOD1濃度,通常以O(shè)D值對標(biāo)準(zhǔn)品濃度作圖,建立線性回歸方程。